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赭曲霉毒素A

型号/规格:ZYD-ZQMDSA
检测项目:赭曲霉毒素A
产品用途:用于定性、定量检测谷物、酒类等食品和饲料等样本中的赭曲霉毒素A时的样品前处理。
产品关键词:赭曲霉毒素A 免疫亲和柱
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产品详情

赭曲霉毒素A免疫亲和柱操作说明书

【概要】

赭曲霉毒素A (Ochratoxin A)是曲霉属和青霉属的真菌形成的次级代谢产物,属烈性的肾脏毒和肝脏毒,广泛存在于各种食物中,谷物及其副产品是赭曲霉毒素A的主要来源。动物实验表明摄入了被这种毒素污染的饲料后,会发生急性或慢性中毒症。防止污染赭曲霉毒素A的食品和饲料直接或间接地进入人类食物链,加强对赭曲霉毒素A的检测十分重要。


【适用范围及性能】

用于定性、定量检测谷物、酒类等食品和饲料等样本中的赭曲霉毒素A时的样品前处理。

柱容量:≥200ng

回收率:≥90%


【试验原理】

本产品的测定的基础是抗原抗体反应,赭曲霉毒素A单克隆抗体连接在柱内凝胶上,样品中的赭曲霉毒素A经过提取、过滤、稀释,然后将样品提取液缓慢的通过赭曲霉毒素A免疫亲和层析柱,在免疫亲和柱内,赭曲霉毒素A与抗体结合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱赭曲霉毒素A,然后注入到分析仪器中用于检测。


【包装组成】

根据不同规格,每一个盒中包含5-25支赭曲霉毒素A免疫亲和层析柱及1份说明书。


【需要而未提供的设备及试剂】

设备:

┅┅高速均质器或组织匀浆机

┅┅粉碎机

┅┅200ml/50ml量筒

┅┅天平:感量0.1g

┅┅微量移液器:单道 100?l~1000?l

┅┅槽纹滤纸(折叠快速定性或定量滤纸)

┅┅玻璃微纤维滤纸(1.5?m孔径)

┅┅50ml漏斗

┅┅一次性玻璃试管

┅┅泵流操作架(包括空气泵,不同容积的玻璃注射器等)

试剂:

┅┅甲醇(色谱级)

┅┅蒸馏水或去离子水

┅┅pH7.0磷酸盐缓冲溶液(PBS缓冲液):称取8.0g氯化钠,1.2g磷酸氢二钠,0.2g磷酸二氢钾,0.2g氯化钾,用990mL纯水溶解,然后用浓盐酸调节pH值至7.0,最后用纯水稀释至1000mL

┅┅清洗缓冲液:25g 氯化钠+5g碳酸氢钠+0.1mL吐温-20

  用纯水稀释至1000 mL


【试剂配制】

样品提取液:配制甲醇-水(8:2)溶液作为样品提取液


【样本处理步骤】

(一)花生,玉米,大米,小麦及其制品和饲料

┅┅称取20g粉碎的样品于100mL容量瓶中,加入5.0g氯化钠,以甲醇-水(8:2)溶液定容;

┅┅转移到均质杯中,以均质器高速搅拌,提取2分钟;

┅┅4000r/min离心5min或用定量滤纸过滤;

┅┅取10mL滤液并加入40mLPBS缓冲液稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤,取过滤后液体待测;

┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器;

┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约1滴/S流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;

┅┅以10.0mL清洗缓冲液淋洗柱子1次,流速为1滴-2滴/S,弃去全部流出液,

┅┅再以10.0mL水淋洗柱子1次,流速为1滴-2滴/S,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体;

┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,流速为1 滴/S,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。


(二)啤酒,黄酒等酒类

┅┅取10mL试样脱气后与90mLPBS缓冲液混匀,用玻璃微纤维滤纸过滤,取过滤后液体待测;

┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器;

┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约1滴/S流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;

┅┅以10.0mL清洗缓冲液淋洗柱子1次,流速为1滴-2滴/S,弃去全部流出液,

┅┅再以10.0mL水淋洗柱子1次,流速为1滴-2滴/S,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体;

┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,流速为1 滴/S,收集全

  部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。


【结果判定】

经免疫亲和柱净化后,收集到的甲醇洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测,也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。收集到的1ml洗脱液中的赭曲霉毒素A含量相当于1g样品中赭曲霉毒素A含量。


【注意事项】

┅┅赭曲霉毒素危害极大,应戴手套操作。

┅┅不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。


【贮藏条件及保存期】

贮藏条件:亲和柱可于常温保存,2-8℃储存可延长有效期,不可冻存

保存期:该产品有效期为12个月。










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